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當我們提取核酸時(shí),都發(fā)生了什么?

更新日期:2021年4月13日 大字 小字

2020年初, “核酸檢測”的概念由于眾所周知的原因突然正式“出圈”,成為了一時(shí)之間大眾口中的熱詞。此中,自動(dòng)化核酸提取設備由于操作簡(jiǎn)單、通量高、速度快的優(yōu)點(diǎn)而迎來(lái)了罕見(jiàn)的廣泛追捧,那么,當它究竟都實(shí)現了哪些工作呢?

 

有些小伙伴可能反手就是一個(gè)流程原理圖:


那更進(jìn)一步的解釋呢?

重點(diǎn)來(lái)了!

裂解:通常裂解液中會(huì )含有洗滌劑,根據樣本的不同還會(huì )添加蛋白酶,用于裂解和溶解蛋白質(zhì);另外還有高濃度的離液鹽,如異硫氰酸胍,它能擾亂氫鍵,破壞核酸與水之間的結合,使核酸能夠與磁珠結合。


通過(guò)這里我們能夠理解:1.為什么裂解步驟經(jīng)常需要加熱;2.為什么裂解液會(huì )容易起泡;3.為什么裂解的步驟需要長(cháng)時(shí)間的混合。

洗滌:洗滌液中通常含有較大比例的乙醇,一方面能降低溶液介電常數使核酸沉淀以更好的結合,另一方面能洗去殘留的鹽;有時(shí)候這里還會(huì )有部分離液鹽,用以去除上一步殘留的蛋白質(zhì)。


通過(guò)這里我們能夠理解:1.添加無(wú)水乙醇的作用;2.不同洗滌步驟的目的區別。

洗脫:由于在上一步中經(jīng)過(guò)了較大體積的乙醇,在正式洗脫磁珠之前通常會(huì )經(jīng)過(guò)“晾干”,充分利用乙醇的易揮發(fā)性,避免乙醇的殘留影響后續的實(shí)驗。當乙醇被去除,核酸分子恢復親水性,在弱堿性的洗脫液中,核酸被輕易地溶解,從而從磁珠上被解放出來(lái)。

至此,完整的核酸提取流程就結束了,通過(guò)流程的清晰化,能夠更好地優(yōu)化試劑盒-儀器之間的磨合,縮短磨合時(shí)間,節約時(shí)間、人力與經(jīng)濟成本。



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